SELEX法筛选宫颈癌前病变核酸适配子

构建随机ssDNA文库，通过SELEX技术，以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞，以上皮内低级别病变 (CIN1)、上皮内高级别病变 (CIN2、CIN3) 和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞，经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库，经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物，为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础，提供新思路。利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物，对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化，分析确定50 μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为：最佳退火温度为49.5 ℃，最佳循环数为15个循环；间接不对称PCR的最佳反应条件为：50 μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为 80∶1，最佳循环数为35个循环。实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库，在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA，并具有良好的重复性，为顺利筛选适配子提供保证