抗鸡白细胞介素4单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备鸡白细胞介素4 (chIL-4) 单克隆抗体，将成熟的chIL-4基因亚克隆至原核表达载体pET-28a和pGEX-6P-1上，然后在大肠杆菌中分别诱导重组蛋白His-chIL-4和GST-chIL-4的表达，并纯化。将纯化后的His-chIL-4作为免疫原免疫BALB/c小鼠，经4次免疫后，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2/0) 融合。将纯化后的GST-chIL-4作为筛选抗原，利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后，获得3株稳定分泌抗chIL-4蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为1G11-3B、2E5-3D和1G11-5H。经ELISA检测，3株单克隆抗体的亚型均为IgG1，亲和力解离常数 (Kd) 分别为1.79×10–9、1.61×10–9和2.36×10–9。经Western blotting及间接免疫荧光试验鉴定，3株单克隆抗体均能特异性识别原核和真核表达的chIL-4蛋白。Western blotting试验证明1G11-3B、2E5-3D和1G11-5H识别的抗原表位区域分别为chIL-4蛋白N端的第1–40、80–112和40–80位氨基酸。该单克隆抗体的制备为chIL-4的检测和生物学功能研究奠定了基础