途径工程及Tn5转座子介导突变提高大肠杆菌丙酮酸生产

为了开发丙酮酸高产菌株，以大肠杆菌MG1655为出发菌株，通过基因敲除阻断副产物途径构建了产丙酮酸大肠杆菌工程菌KLPP。进一步利用pUT Mini-Tn5载体进行转座子随机突变，构建了含有7 197个单克隆的突变体文库。使用基于丙酮酸的二硝基苯肼显色法，建立了96孔板-酶标仪快速筛选方法，经过两轮的筛选，成功筛选到了6个突变体菌株，比KLPP丙酮酸产量提高了38%、31%、19%、28%、44%和14%。利用全基因组重测序确定了其转座子插入的位置，进而确定了可能影响丙酮酸产量的基因位点，为后续菌株改造工作奠定了基础