基于葡萄糖脉冲的同位素稀释质谱检测法标品制备

同位素稀释质谱检测法 (IDMS) 是目前进行胞内代谢物浓度高通量检测精度最高的一种方法，这个方法的关键就是制备待检测代谢物对应的13C全标记的标品。传统制备13C全标记标品的方法是采用批培养的模式获取，但该方法所制备的胞内代谢物浓度通常较低。通过以13C全位标记葡萄糖作为唯一碳源培养毕赤酵母G/DSEL菌种，采用13C全位标记葡萄糖脉冲刺激法，结合快速取样淬灭方法的新方法，成功制备了带13C标记标品并提高了其浓度。经液质联用 (LC-MS) 与气质联用 (GC-MS) 结果分析，与传统制备方法相比，胞内大部分有机酸、磷酸糖、氨基酸和核苷酸类物质的浓度实现了约2–10倍的提高。因此底物脉冲法可以有效提高13C全标葡萄糖的单位利用率，并能实现对胞内部分含量低于仪器检测限的代谢物的检测