HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装

构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白，探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1 (NL4-3毒株) CAP2NC基因片段，并将其连接到原核表达载体pTO-T7，获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC，然后转化至大肠杆菌BL21 (DE3) 菌株，经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC。SDS-PAGE结果表明，重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达，经纯化后纯度约为95%。ELISA检测表明重组蛋白CAP2NC可被HIV-1衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别，具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装，负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA存在条件下，可形成空心管状颗粒，其形态结构与HIV-1病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC蛋白具有体外自组装的性质，为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础