hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定

hLCN6 (Human lipocalin 6) 是附睾特异性分泌蛋白，它能与精子结合，对精子的成熟发挥着重要作用。为了探究应用抗hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠技术分离混合细胞中精子的可行性，建立混合斑中精子细胞分离的新方法，制备了不同比例的精子-上皮细胞混合悬液及混合斑样本，以生物素标记的hLCN6单克隆抗体孵育样品，再用亲和素包被的免疫磁珠捕获分离精子细胞，提取精子DNA进行PCR-STR (Short tandem repeat) 分型，同时以差异裂解法提取精子，比较两者的差异。经ELISA检测，hLCN6单克隆抗体与抗原的亲和力解离常数 (Kd) 为3.47×10–9 mol/L。免疫印迹和免疫荧光结果显示，hLCN6在精子中可检测到，主要定位于精子头部的顶体后区域，但不能在上皮细胞中检测到。hLCN6抗体偶联的免疫磁珠复合物能够实现精子细胞的捕获和分离，显微镜观察显示免疫磁珠能够与精子头部特异性结合。对精子个数为103/mL的混合悬液，STR分型成功率 (正确分型13个以上，RFU>200) 为90%。当精子数量≥104/mL时，分型成功率达100%；对精子数分别为103/mL、104/mL、105/mL的混合斑STR分型成功率分别为40%、90%和100%。综上，hLCN6抗体偶联免疫磁珠法可以有效分离混合细胞中的精子，分型成功率高于传统的差异裂解法。该方法简单高效，可作为性侵案件中法医混合斑检验的有效补充手段