鉴定cyclic di-GMP效应蛋白：高通量筛选策略与实验验证方法

环二鸟苷单磷酸 (cyclic di-GMP或c-di-GMP) 是细菌细胞中广泛存在的第二信使，调控细菌生物被膜发育、致病力、运动性、胞外多糖产生及细胞周期在内的诸多重要生理表型。c-di-GMP通过结合多种类型的效应子 (包括核糖开关或效应蛋白) 来发挥调控功能。由于c-di-GMP分子在构象上具有多变性，其结合的效应子同样具有多样性。新型效应蛋白的筛选、鉴定是当前细菌信号转导领域的研究热点和难点，也是解析c-di-GMP调控机制的首要环节。本文在阐述c-di-GMP结合不同类型的效应蛋白并调控细菌生物被膜发育的基础上，综述了目前筛选c-di-GMP效应蛋白的方法，包括遗传筛选、亲和色谱结合质谱鉴定、DRaCALA系统鉴定以及基于分子对接的预测等。同时，对验证c-di-GMP效应蛋白的技术，如等温微量热滴定、表面等离子共振、微量热泳动在内的多种验证方法进行了总结，对比了这些策略和方法在应用上的优、缺点，为在细菌及其真核宿主基因组水平鉴定c-di-GMP效应蛋白的研究提供参考