CK-MB特异性单抗的制备方法及其应用

本研究拟建立肌酸激酶同工酶MB (CK-MB) 特异性单克隆抗体 (mAb) 的研制方法，对抗CK-MB单抗进行评价分类及性质鉴定，并初步建立CK-MB定量检测试剂。以CK-MB抗原免疫BALB/c小鼠，利用常规单抗制备技术，使用间接和捕获ELISA差异筛选法筛选单抗。利用肌酸激酶同工酶 (CK-MM/BB/MB) 抗原对所制备单抗的抗原识别表位进行鉴定，另通过免疫印迹法及合成CK-MM、CK-BB差异性的线性表位肽鉴定对所制备的单抗进行评价分类。使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测CK-MB抗原的配对mAb，并初步建立CK-MB定量检测试剂。使用74例临床标本初步评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性。最终，我们成功筛选到22株稳定分泌抗CK-MB抗体的杂交瘤细胞株，这些单抗可以分为线性、偏构象的CK-MB和CK-MM或者CK-BB交叉的单抗以及与CK-MB特异反应的偏构象型单抗，并使用偏构象型单抗研制出CK-MB定量检测试剂，该试剂与罗氏试剂相关系数r达到0.930 9。综上所述，本研究建立了研制CK-MB偏构象型特异性单抗的筛选方法，通过对所筛选的单抗进行分析鉴定并建立了CK-MB定量检测试剂，与罗氏试剂检测结果符合率高