基于亚细胞定位的大豆和鹰嘴豆原生质体分离体系的建立与优化

以湘豆3号大豆和Kabuli型鹰嘴豆幼嫩叶片为材料，研究了酶解种类及配比、酶解液中甘露醇浓度、酶解液pH和酶解时间对两种豆科植物幼嫩叶片原生质体产量和存活率的影响。结果表明，湘豆3号大豆叶片在含有0.5%纤维素酶Onozuka R-10、0.8%半纤维素酶Hemicellulase、0.8%离析酶Macerozyme R-10、0.4%果胶酶Pectolyase Y-23、0.1% 2-(N-吗啡啉)乙磺酸 (MES) 和10%甘露醇的酶解液中 (pH 6.0)，27 ℃黑暗条件下恒温水浴振荡 (45 r/min) 酶解6 h，分离得到的原生质体产量和存活率最高；Kabuli型鹰嘴豆叶片在含有0.5%纤维素酶Onozuka R-10、0.8%半纤维素酶Hemicellulase、0.8%离析酶Macerozyme R-10、0.1% MES和10%甘露醇酶解液中 (pH 4.8)，27 ℃黑暗条件下恒温振荡水浴 (45 r/min) 7–8 h，分离得到的原生质体产量和存活率最高。通过上述件分离到的湘豆3号大豆和Kabuli型鹰嘴豆幼嫩叶片原生质体用于亚细胞定位的效果最好