猪O型口蹄疫病毒细菌样颗粒疫苗的制备与免疫原性鉴定

验证基于革兰氏阳性增强基质 (Gram-positive enhancer matrix，GEM) 展示口蹄疫病毒细菌样颗粒 (Bacteria-like particles，BLP) 疫苗的可行性。按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成基于猪口蹄疫病毒Mya98株序列的3种抗原基因设计，并将其插入到含有锚钩蛋白基因的原核表达载体pQZ-PA，鉴定阳性后转入Escherichia coli BL21，进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blotting对目的基因表达及产物的可溶性进行分析。利用GEM颗粒纯化目的蛋白，制备细菌样颗粒疫苗抗原；利用BCA试剂盒测定重组蛋白的浓度，将重组蛋白与白油佐剂乳化，制备疫苗，免疫5周龄小鼠，同时设商品化多肽苗对照与空白对照，免疫后不同时间采集试验小鼠血清，利用口蹄疫病毒多肽ELISA抗体检测试剂盒和O型口蹄疫抗体液相阻断酶联免疫(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 检测试剂盒检测免疫小鼠血清的抗体水平；利用噻唑蓝比色法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT) 测定淋巴细胞增殖情况；利用荧光定量PCR方法检测相关细胞因子表达，评价细胞免疫水平。SDS-PAGE结果表明，设计在大肠杆菌中的3种口蹄疫病毒抗原基因均以可溶形式获得高效表达；Western blotting结果显示，表达的重组蛋白能够与口蹄疫病毒阳性血清发生反应，利用GEM颗粒能够实现重组蛋白的一步离心纯化，制备BLP疫苗抗原；免疫试验结果表明，设计的重组抗原B (T1BT2) 4B不但能够刺激免疫小鼠产生更高水平的多肽特异性ELISA抗体与口蹄疫特异性液相阻断抗体，而且产生了更高水平的脾淋巴细胞增殖及Th1型的细胞因子分泌。初步实验结果表明，本研究制备的BLP疫苗GEM-B (T1BT2) 4B具有良好的免疫原性，为研究口蹄疫病毒基因工程亚单位疫苗开辟了一条新的思路