H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析

为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响，本研究构建了重组真核表达载体pPICZaA-H5HA，并将其转化至毕赤酵母，经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示，目的蛋白可在酵母中高效分泌表达，发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL，分子量约为37 kDa。将酵母发酵上清经浓缩、纯化后，获得重组目的蛋白H5HA。将不同剂量的H5HA与不同佐剂联用后分别以滴鼻和肌肉注射两种方式免疫试验动物，进行免疫效力的评价。试验结果表明，H5HA具有较好的免疫原性，可诱导SPF鸡产生较高水平的IgG (血凝抑制效价达1∶64、病毒中和抗体效价为1∶218)，最佳使用剂量为50 μg/羽，与白油佐剂联用时效果最佳，且肌肉注射方式的免疫效果优于滴鼻方式。研究结果为H5亚型流感病毒亚单位疫苗的研制提供了理论支撑