野油菜黄单胞菌中烯脂酰ACP还原酶的功能鉴定

烯脂酰ACP还原酶是细菌脂肪酸合成的关键酶之一．本研究通过生物信息学分析发现，野油菜黄单胞菌Xanthomonas campestris (Xcc) 8004基因组中XC_0119 (XccfabV) 注释为反-2-烯脂酰CoA还原酶基因．但其编码产物与铜绿假单胞菌的烯脂酰ACP还原酶FabV具有较高的同源性，并含有相同的催化活性中心Tyr-(Xaa)8-Lys序列．用携带XccfabV的质粒载体互补大肠杆菌fabI温度敏感突变株JP1111，转化子能在42℃生长，表明XccfabV能遗传互补大肠杆菌fabI突变．体外重建脂肪酸合成反应表明，XccFabV能催化不同链长的烯脂酰ACP还原为脂酰ACP，且催化活性不受三氯森抑制．遗传学研究表明，XccfabV是必需基因，不能获得XccfabV基因敲除突变株．将携带大肠杆菌fabI的外源质粒导入野生菌后，可敲除染色体上的fabV基因，获得的替换突变株生长特性和脂肪酸组成未发生显著变化，但替换突变株对三氯森敏感．上述结果证实，野油菜黄单胞菌fabV是必需基因，编码烯脂酰ACP还原酶，参与脂肪酸从头合成反应，且FabV是Xcc对三氯森耐受的根本原因