轴突导向因子netrin-1对早期糖尿病大鼠血视网膜屏障的影响

目的观察探讨外源性轴突导向因子netrin-1对早期糖尿病(DM)大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及可能的作用机制。 方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只, 采用随机数字表法将其分为正常对照组、DM+平衡盐溶液(BSS)组、DM+netrin-1低剂量组、DM+netrin-1高剂量组, 每组均为20只大鼠。链脲佐菌素腹腔注射诱导DM模型。DM 3个月时, DM+netrin-1低剂量组、DM+netrin-1高剂量组大鼠玻璃体腔分别注射10、100 mg/ml的netrin-1 5μl；DM+BSS组大鼠玻璃体腔注射等体积BSS。高糖高脂饲养1个月后处死所有大鼠, 摘除眼球。每组随机选取5只大鼠行苏木精-伊红染色观察各组大鼠视网膜微血管改变；免疫组织化学染色检测视网膜闭合蛋白(occludin)的表达以及荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)观察occludin mRNA的表达；伊凡思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠视网膜微血管结构改变和渗漏。独立样本t检验对两组间指标进行统计学分析。多组间比较采用单因素方差分析。 结果光学显微镜观察发现, DM+BSS组大鼠视网膜神经节细胞层水肿, 排列紊乱, 视网膜微血管扩张, 结构异常；DM+netrin-1高剂量组大鼠视网膜神经节细胞水肿减轻, 微血管扩张程度减轻。免疫组织化学染色结果显示, DM+netrin-1低剂量组、DM+netrin-1高剂量组大鼠视网膜棕黄色颗粒染色范围扩大, 颜色加深。RT-PCR检测结果显示, 与正常对照组大鼠视网膜中occludin mRNA表达比较, 其余各组大鼠视网膜中occludin mRNA表达减少, 差异有统计学意义(P＜0.05)。DM+BSS组、DM+netrin-1低剂量组、DM+netrin-1高剂量组间大鼠视网膜平均积分吸光度[A, 旧称光密度(OD)]值(IA值)比较, 差异有统计学意义(F=177.13, P=0.00), 且DM+netrin-1高剂量组大鼠视网膜occludin表达较DM+netrin-1低剂量组高。DM+BSS组大鼠视网膜IA值与DM+netrin-1低剂量组比较, 差异有统计学意义(t=-13.98, P=0.00)；DM+netrin-1高剂量组大鼠视网膜IA值与正常对照组比较, 差异有统计学意义(t=12.87, P=0.00)。EB渗漏试验结果显示, DM+BSS组、DM+netrin-1低剂量、DM+netrin-1高剂量组间大鼠视网膜EB渗漏量比较, 差异有统计意义(F=179.69, P=0.00)；DM+netrin-1低剂量组大鼠视网膜EB渗漏量与DM+netrin-1高剂量组比较, 差异有统计学意义(t=12.73, P=0.00)。 结论玻璃体腔注射外源性netrin-1对早期DM大鼠BRB有保护作用；这种保护作用可能是通过抑制视网膜occludin的减少实现