小鼠室管膜下区神经干细胞增殖及分化研究

目的探讨新生小鼠室管膜下区（subventricular zone,SVZ）神经干细胞（neural stem cells,NSCs）体外培养方法，为治疗神经系统疾病寻找合适的种子细胞。 方法取SPF级新生ICR小鼠SVZ组织，采用机械法和酶消化法分离培养NSCs并传代，倒置显微镜下观察细胞形态。取第3代细胞行抗SOX-2和抗巢蛋白（Nestin）免疫荧光染色鉴定，BrdU标记法及MTT法检测比较培养3、7 d细胞增殖能力。以未添加bFGF和EGF的无血清培养基诱导第3代NSCs分化，抗β-微管蛋白Ⅲ（Tuj-1）、GFAP免疫荧光染色检测比较诱导3、7 d NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的能力。 结果成功分离培养新生小鼠SVZ组织中细胞，倒置显微镜下见原代培养3 d即有神经球形成，至7 d时见大量悬浮生长神经球，且体积较前增大，部分神经球出现融合及贴壁分化现象。细胞呈典型NSCs形态。免疫荧光染色鉴定获得细胞为NSCs。细胞增殖能力检测显示，体外培养3 d的NSCs中BrdU阳性细胞数为（75.817±2.961）个、吸光度（A）值为0.478±0.025，均显著高于培养7 d的（56.600±4.881）个、0.366±0.032（t=3.366，P=0.028；t=2.752，P=0.011）。经诱导培养后，NSCs能分化为神经元、星形胶质细胞；细胞分化能力检测显示，诱导分化3 d时Tuj-1、GFAP阳性细胞百分比分别为23.1%±3.7%、23.7%±3.8%，显著低于诱导分化7 d（40.1%±3.6%、37.1%±4.5%）（t=3.285，P=0.030；t=3.930，P=0.017）。 结论体外培养的新生小鼠SVZ处NSCs时具有自我增殖和多分化潜能，且体外培养时间不同，细胞增殖、分化能力亦不同