人脂肪干细胞复合猪小肠黏膜下层脱细胞基质/壳聚糖温敏凝胶体内构建组织工程脂肪的研究

目的探讨人脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）与猪小肠黏膜下层脱细胞基质微粉（small intestinal submucosa powder，SISP）/壳聚糖温敏水凝胶复合构建组织工程脂肪的可行性。 方法取乳癌患者自愿捐赠脂肪组织，Ⅰ型胶原酶消化分离hADSCs。取第3代细胞与SISP/壳聚糖温敏水凝胶混匀，制成浓度为1×106个/mL的液态凝胶。将24只5周龄健康雌性裸鼠随机分为实验组及对照组（n=12），于颈背部皮下分别注射1 mL hADSCs+SISP/壳聚糖温敏水凝胶或SISP/壳聚糖温敏水凝胶。注射后0、1、2、4、8周测量植入物体积，评价其降解情况；注射后1、2、4、8周两组各处死3只裸鼠，大体观察后取材行组织学及免疫组织化学染色观察，评价植入物成分构成变化（HE染色）、成脂能力（油红O染色）、血管形成情况（CD31标记）及材料内hADSC存活分化（人波形蛋白标记）。 结果注射后随时间延长，两组植入物均逐渐缩小；但各时间点实验组植入物体积均大于对照组，且8周时差异有统计学意义（t=3.348，P=0.029）。大体观察示各时间点两组植入物均边界清楚、无粘连，至8周时均可见黄色新生组织，且表面有毛细血管包裹。组织学观察示，注射后植入物结构逐渐变紧密，SISP逐渐降解，且实验组降解速度较对照组慢，脂肪逐渐形成，至8周时实验组中央出现少量成熟脂肪组织；各时间点实验组油红O染色阳性面积均大于对照组，且8周时差异有统计学意义（t=3.411，P=0.027）。免疫组织化学染色示，各时间点实验组均有hADSCs存活；植入物有新生血管生成，2周时达峰值，各时间点两组CD31阳性面积比较差异无统计学意义（P＞0.05），但实验组植入物中血管化更均匀。 结论SISP/壳聚糖温敏水凝胶可作为载体，复合hADSCs植入裸鼠体内后可构建组织工程脂肪