c-Met 基因慢病毒载体的构建及其配体肝细胞生长因子对 SW480 细胞侵袭能力的影响

目的 观察慢病毒介导的 RNA 干扰 c-Met 基因后肝细胞生长因子（HGF）对结肠癌细胞株 SW480 侵袭能力的影响。 方法 实验分为 3 组，正常对照组（NC 组）：正常目的细胞加 shRNA 阴性对照病毒感染细胞（NC 组又分为 NC-20 和 NC-40 2 个亚组，分别代表正常目的细胞感染 shRNA 阴性对照病毒后在 Transwell 外室中分别加入浓度为 20 和 40 ng/mL 的 HGF）；c-Met 基因敲除组（KD 组）：正常目的细胞加 RNA 干扰靶点病毒感染细胞（KD 组又分为 KD-20 和 KD-40 2 个亚组，分别代表正常目的细胞感染目的基因 shRNA-c-Met 病毒后在 Transwell 外室中分别加入浓度为 20 和 40 ng/mL 的 HGF；KD1、KD2、KD3 和 KD4 组分别表示针对目的基因不同的 RNA 干扰靶点，以挑选其中最有效的干扰靶点）；空白对照组（CON 组）：正常目的细胞加未感染任何病毒的细胞。构建 shRNA-c-Met 慢病毒表达载体，实时定量 PCR（RT-PCR）筛选阳性克隆并测序鉴定；经慢病毒质粒包装后转染 SW480 细胞，转染 48 h 后，RT-PCR 法检测 SW480 细胞中 c-Met mRNA 表达，Western blot 法检测 SW480 细胞中 c-Met 蛋白表达水平；转染 72 h 后，采用流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell 侵袭实验检测细胞的侵袭能力。 结果 shRNA-c-Met 慢病毒表达载体构建成功；shRNA-c-Met 显著下调了 SW480 细胞中 c-Met mRNA 的表达，并且 RNA 干扰靶点病毒感染细胞第 4 靶点时的基因敲减效率最高（81.4%），为最有效靶点。Western blot 检测结果显示，KD 组 SW480 细胞中 c-Met 蛋白表达明显低于 NC 组（P=0.015）和 CON 组（P=0.010），KD 组 SW480 细胞凋亡率明显高于 NC 组（P<0.001）和 CON 组（P<0.001）。细胞转移率在 KD 组、KD-20 组和 KD-40 组均分别明显低于 NC 组（P<0.001）、NC-20 组（P=0.015）及 NC-40 组（P=0.017）；与 NC 组比较，NC-20 组和 NC-40 组的细胞转移率明显升高（P<0.001、P<0.001），且 NC-40 组的细胞转移率明显高于 NC-20 组（P=0.005）；同样，与 KD 组比较，KD-20 组和 KD-40 组的细胞转移率均明显升高（P<0.001、P<0.001），KD-40 组的细胞转移率明显高于 KD-20 组（P=0.014）。 结论 以 c-Met 为靶点的 RNA 干扰能明显下调结肠癌细胞株 SW480 中 c-Met 的表达，c-Met 的表达下调能明显增加细胞凋亡且能降低 HGF 对 SW480 细胞侵袭能力的影响