大鼠纤维化肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的探讨大鼠纤维化肝组织匀浆上清液对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，HUCMSCs）向肝细胞分化的诱导作用。 方法取健康SD大鼠（体重180～220 g），采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液（200 mg/kg，2次/周，共4周）方法制备大鼠肝纤维化模型，取造模成功的纤维化肝组织用于制备肝纤维化诱导培养基。取第3代HUCMSCs进行分组培养7 d，对照组以含10% FBS的DMEM/F12培养基培养，实验组以含10% FBS及50 g/L肝纤维化诱导培养基上清的DMEM/F12培养基培养。倒置显微镜下观察两组细胞形态学变化；取培养7 d的对照组及实验组细胞，采用Western blot法检测甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）、细胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）、CYP3A4表达情况，采用糖原过碘酸-雪夫（periodic acid-schiff，PAS）染色检测细胞储存糖原的能力，分别采用二乙酰肟比色法及ELISA法测定两组细胞培养液中尿素（blood urea nitrogen，BUN）和白蛋白（albumin，ALB）的含量。 结果与对照组长梭形细胞相比，实验组细胞于诱导1 d时即可见到细胞两极回缩，胞体变短；诱导7 d时，细胞呈不规则形或类圆形，胞体丰满。Western blot检测示，对照组细胞未见AFP、CK18、CYP3A4表达；实验组细胞可表达肝细胞特异性标志物AFP、CK18及与代谢功能相关的重要蛋白CYP3A4。对照组上清液中BUN、ALB浓度分别为（0.43±0.07）mmol/L和（8.08±0.41）μg/mL，实验组分别为（2.52±0.20）mmol/L和（41.48±4.11）μg/mL，比较差异均有统计学意义（t=24.160，P=0.000；t=19.810，P=0.000）。PAS染色示，对照组HUCMSCs细胞核呈深蓝色，细胞质呈淡紫色；实验组细胞整个胞体被染成深紫色，细胞核可见。 结论大鼠纤维化肝组织匀浆上清液可快速诱导HUCMSCs向肝细胞分化，形成的肝样细胞不仅具备肝细胞表面标志物，同时有肝药酶的表达，并具有储存糖原、合成BUN及分泌ALB的能力，可部分替代肝细胞功能，这可能是干细胞移植改善肝功能的机制之一