猪小肠黏膜下层细胞外基质促进肝细胞活力和功能基因表达的研究

目的 探讨猪小肠黏膜下层细胞外基质（porcine small intestinal submucosa extracellular matrix，PSISM）对肝细胞活力及相关基因表达的调控，为 PSISM 应用于肝脏组织工程提供实验依据。 方法 实验分为两部分。① 取 PSISM 添加至含 10%FBS 的 H-DMEM 培养基中，制备终浓度为 50、100、200 μg/mL 的 PSISM 培养基；将大鼠肝细胞系 BRL 细胞分别用以上浓度 PSISM 培养基培养（A1、B1、C1 组），以单纯 H-DMEM 培养基培养作为对照（D1 组）。② 取 PSISM 溶解于含 0.1 mol/L NaOH 的 PBS 无菌溶液中，调整溶液浓度为 1%、2%、3%，制备 PSISM 凝胶；将 BRL 细胞分别接种于以上浓度 PSISM 凝胶进行培养（A2、B2、C2 组），鼠尾Ⅰ型胶原凝胶作为对照（D2 组）。培养后第 1、3、5 天，采用 Live/Dead 荧光染色观察细胞形态及存活情况，细胞增殖-毒性检测试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测细胞活力，实时荧光定量 PCR 检测肝细胞特异基因白蛋白（albumin，ALB）、细胞角蛋白 18（cytokeratin 18，CK18）和甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）的表达。 结果 Live/Dead 荧光染色显示各组细胞均存活良好。细胞活力检测显示，PSISM 培养基培养后，第 5 天 C1 组吸光度（A）值显著高于 D1 组（P<0.05），其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）；PSISM 凝胶培养后，A2、B2、C2 组第 3 天和第 5 天A 值显著高于 D2 组（P<0.05），A2 组第 5 天A 值显著高于 B2、C2 组（P<0.05），其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。实时荧光定量 PCR 检测显示，A1、B1、C1 组 ALB、CK18 基因相对表达量较 D1 组显著增高（P<0.05）、AFP 基因相对表达量降低（P<0.05），C1 组 CK18 基因相对表达量显著低于 A1、B1 组（P<0.05）；A2、B2、C2 组 ALB、CK18 基因相对表达量较 D2 组显著增高（P<0.05）、AFP 基因相对表达量降低（P<0.05），A2 组 CK18 基因相对表达量显著高于 B2 组（P<0.05）、AFP 基因相对表达量显著低于 C2 组（P<0.05）。其余各组间各基因相对量表达比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 PSISM 无毒性，对肝细胞有良好相容性，能促进肝细胞活力和功能基因表达，有望作为细胞培养添加物或细胞移植载体用于肝脏组织工程