大鼠脂肪来源干细胞对紫外线造成的软骨细胞 DNA 损伤的修复作用研究

目的 探讨大鼠脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）对紫外线照射造成的软骨细胞 DNA 损伤的修复作用。 方法 取 3～4 周龄 SD 大鼠（体质量 100～120 g）腹股沟脂肪，利用 Ⅰ 型胶原酶消化法体外分离培养 ADSCs 并传代；取第 3 代细胞采用流式细胞仪检测其表面相关标记，行成骨及成脂诱导鉴定其多向分化潜能。另取 SD 大鼠关节软骨，利用酶消化法分离培养软骨细胞并传代，并行甲苯胺蓝染色鉴定。取第 3 代软骨细胞，采用 40 J/m2 剂量紫外线照射；照射后细胞分别以正常培养基培养（照射组）、以含 ADSCs 培养上清的培养基培养（ADSCs 上清组）或与 ADSCs 共培养（ADSCs 组）24 h。以不进行紫外线照射的正常第 3 代软骨细胞作为对照（对照组）。采用 MTS 法检测细胞增殖情况，免疫荧光染色、Western blot 法检测软骨细胞 DNA 损伤标志蛋白磷酸化组蛋白 2A 变异体（phosphorylated histone family 2A variant，γH2AX）的表达情况。 结果 经流式细胞仪检测及成骨、成脂诱导鉴定，所培养细胞为 ADSCs。对照组、照射组及 ADSCs 上清组吸光度（A）值分别为 2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06，照射组及 ADSCs 上清组显著低于对照组，照射组显著低于 ADSCs 上清组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光染色示，照射组、ADSCs 上清组及 ADSCs 组 γH2AX 蛋白荧光强度明显高于对照组，但 ADSCs 上清组及 ADSCs 组 γH2AX 蛋白荧光强度明显弱于照射组，ADSCs 组和 ADSCs 上清组则无明显区别。Western blot 法检测示，照射组、ADSCs 上清组及 ADSCs 组 γH2AX 蛋白相对表达量均明显高于对照组，但 ADSCs 上清组及 ADSCs 组显著低于照射组，差异均有统计学意义（P<0.05）；ADSCs 组和 ADSCs 上清组比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 大鼠 ADSCs 有助于恢复紫外线照射后的软骨细胞的增殖，降低 DNA 损伤标志蛋白 γH2AX 的表达，对紫外线照射所致软骨细胞损伤具有修复作用