沉默 Piezo1 机械敏感型离子通道对 MC3T3-E1 成骨细胞迁移的影响

目的研究 Piezo1 机械敏感型离子蛋白在小鼠 MC3T3-E1 成骨细胞迁移中的作用。方法取第 5～10 代小鼠 MC3T3-E1 成骨细胞，分为 Piezo1-小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）转染组（A 组）、阴性对照组（B 组）和空白对照组（C 组）。A、B 组分别采用 siRNA 转染试剂将 Piezo1-siRNA 或阴性对照 siRNA 转染入小鼠 MC3T3-E1 成骨细胞，C 组仅加入 siRNA 转染试剂，在倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率。采用免疫荧光染色和 Western blot 检测各组 Piezo1 蛋白表达水平；采用 Transwell 细胞迁移实验和细胞划痕实验检测 Piezo1-siRNA 转染后 MC3T3-E1 成骨细胞迁移能力的变化。结果转染 48 h 后，A 组可见细胞体积较未转染细胞略有增大，细胞突变长增粗，但细胞集落有所减少，悬浮细胞较未转染增多，细胞碎片增多。荧光显微镜下可见 B 组小鼠 MC3T3-E1 成骨细胞中出现绿色荧光，转染效率为 68.56%±4.12%。免疫荧光染色及 Western blot 检测示，A 组细胞内 Piezo1 蛋白表达水平均显著低于 B、C 组，差异有统计学意义（P<0.05）；B、C 组间差异无统计学意义（P>0.05）。Transwell 细胞迁移实验及细胞划痕实验检测示，A 组每孔迁移细胞数及培养 1～4 d 的细胞划痕愈合率均明显低于 B、C 组，差异有统计学意义（P<0.05）；B、C 组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论沉默 Piezo1 基因能显著抑制小鼠 MC3T3-E1 成骨细胞的迁移能力