肿瘤特异性结核抗原Ag85A基因慢病毒表达载体构建

目的构建小鼠端粒酶催化亚单位启动子（murine telomerase catalytic subunit promoter,PmTERT）调控的结核杆菌抗原基因Ag85A肿瘤特异性慢病毒表达载体，为肿瘤靶向性免疫基因治疗的研究奠定基础。 方法用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）方法克隆PmTERT，用荧光素酶（luciferase）活性检测方法研究PmTERT在小鼠和人肿瘤细胞及正常细胞中的转录活性。通过核酸分子克隆方法，分别构建巨细胞病毒（cytomegalo virus，CMV）启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体，并用基因测序和Western blot方法对重组载体进行鉴定。 结果本研究克隆的331 bp大小的PmTERT在小鼠Lewis肺癌细胞、人A549肺癌细胞、EC-109食管癌细胞中均有转录活性，在小鼠NIH3T3胚胎成纤维细胞和人MRC-5胚肾成纤维细胞中无转录活性；成功构建分别由CMV启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体pLVX-Ag85A-CMV和pLVXAg85A-PmTERT；感染pLVX-Ag85A-CMV的Lewis细胞和NIH3T3细胞均有Ag85A蛋白表达，感染pLVX-Ag85APmTERT的Lewis细胞有Ag85A表达，感染pLVX-Ag85A-PmTERT的NIH3T3细胞无g85A表达。 结论PmTERT具有肿瘤特异性转录活性，其驱动的结核杆菌抗原基因可以在肿瘤细胞中靶向性表达