两种实时定量聚合酶链反应方法检测血浆微量微 RNA 的比较

目的 比较用茎环和多腺苷酸聚合酶（poly A polymerase，PAP）加尾实时定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）法检测血浆中微量微 RNA（microRNA，miRNA）的区别，并评价 2 种常用内参基因的表达稳定性。 方法 分离成年 Sprague Dawley 大鼠血浆提取 miRNA，使用茎环和 PAP 加尾实时定量 PCR 法检测血浆中 rno-miR-200b-3p 和 rno-miR-126-3p 的表达水平，采用 rno-miR-103a-3p 和 U6 作为内参，采用 2 △Ct 法计算比较两种实时定量方法和内参的选择。 结果 茎环法相较于 PAP 加尾法检测 Ct 值可以降低 2～4 个循环数，检测灵敏度增加了 10 倍；PAP 加尾法溶解曲线在明显单峰之前可见小峰，茎环法显示独立单峰，茎环法特异性更优；U6 作为内参相对于 rno-miR-103a 更稳定。 结论 对于 miRNA 浓度偏低的少量样本检测，茎环法有准确、灵敏、特异的优点；对于 miRNA 含量丰富、大规模组织样本的检测，PAP 加尾法则更适用。对于内参基因的选择，使用 U6 进行 miRNA 半定量相对于 rno-miR-103a-3p 更稳定，重复性更强