天然水蛭素对人微血管再生作用的初步研究

目的 研究天然水蛭素对人微血管内皮细胞（human microvascular endothelial cells，HMVECs）增殖的影响及其诱导血管再生的机制。 方法 取 HMVECs 接种至 Matrigel 基质胶培养 24 h，体外建立三维培养模型，于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。然后将细胞三维培养模型随机分为不同浓度天然水蛭素培养组（1、4、7 ATU/mL 组）以及单纯含 10%FBS 的 DMEM 培养基培养组（对照组）。各组细胞三维培养模型加入对应培养基后，培养 24、48、72 h 采用细胞计数试剂盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）检测细胞增殖情况；培养 24 h 行成管实验并采用免疫荧光染色法测定细胞 VEGF 及 Notch1 表达水平。 结果 细胞三维培养观察示，HMVECs 于基质胶上贴附良好，24 h 时完全形成管腔样结构。CCK-8 检测示，各时间点 1、4 ATU/mL 组 A 值均高于对照组（P<0.05），其中 4 ATU/mL 组最高；而 7 ATU/mL 组A 值显著低于对照组以及 1、4 ATU/mL 组（P<0.05）。细胞成管实验示，1、4 ATU/mL 组成管数量较对照组及 7 ATU/mL 组明显增多，且 4 ATU/mL 组多于 1 ATU/mL 组，差异有统计学意义（P<0.05）；7 ATU/mL 组与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。免疫荧光染色示，与对照组比较，1、4 ATU/mL 组 Notch1 表达量增高，7 ATU/mL 组降低；其中 4、7 ATU/mL 组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。1、4、7 ATU/mL 组 VEGF 表达量均较对照组增高，4 ATU/mL 组高于 1、7 ATU/mL 组，差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 低、中浓度天然水蛭素可促进 HMVECs 增殖使血管再生，高浓度天然水蛭素则对 HMVECs 增殖及血管再生起抑制作用；其作用机制可能与 VEGF-Notch 信号通路有关