成软骨相关 miR-4287 调控人软骨细胞聚蛋白多糖酶-1 表达的研究

目的 探讨成软骨相关 miR-4287 对人软骨细胞聚蛋白多糖酶-1（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motif 4，ADAMTS4）调控作用及其机制。 方法 取自愿捐赠的膝关节正常及骨关节炎软骨组织，采用实时荧光定量 PCR 检测 miR-4287 和 ADAMTS4 mRNA 表达量；然后分离培养软骨细胞，取第 1 代骨关节炎细胞，给予 IL-1β 处理，观察其对软骨细胞 miR-4287 和 ADAMTS4 mRNA 表达的影响；分别给予 MAPK 信号通路抑制剂 SP600125 以及 NF-κB 信号通路抑制剂 SN50 预处理后联合 IL-1β 刺激，观察 IL-1β 介导的信号通路对软骨细胞 miR-4287 和 ADAMTS4 mRNA 表达的影响；分别转染 miR-4287 模拟物及其阴性对照、miR-4287 抑制物及其阴性对照，观察 miR-4287 调控软骨细胞 ADAMTS4 mRNA 及蛋白的表达。荧光素酶报告实验验证 miR-4287 与 ADAMTS4 mRNA 3’非翻译区（untranslated region，UTR）的直接结合效应。 结果 与正常软骨组织比较，骨关节炎软骨组织 miR-4287 相对表达量下降，ADAMTS4 mRNA 相对表达量上升，比较差异有统计学意义（P<0.05）。IL-1β 下调软骨细胞 miR-4287 表达、上调 ADAMTS4 mRNA 表达，与未经 IL-1β 处理的软骨细胞相比差异均有统计学意义（P<0.05）。经 IL-1β 介导的信号通路抑制剂预处理后，软骨细胞 miR-4287 相对表达量上升，ADAMTS4 mRNA 相对表达量降低，与未经信号通路抑制剂预处理细胞相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。转染 miR-4287 模拟物后，软骨细胞内 ADAMTS4 mRNA 及蛋白表达均降低（P<0.05）；而转染 miR-4287 抑制物后，软骨细胞内 ADAMTS4 mRNA 及蛋白表达均升高（P<0.05）。无论结合位点为野生型或突变型，过表达 miR-4287 均不能改变报告载体的荧光素酶活性（P>0.05）。 结论 成软骨相关 miR-4287 可能是一种与软骨退变相关的 miRNA。miR-4287 能调控人软骨细胞 ADAMTS4 表达，但不是通过靶向结合 mRNA 3’UTR 的方式发挥作用，其具体机制有待进一步研究