人牙骨移植材料对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 增殖分化的影响

目的 探讨人牙骨移植材料对巨噬细胞增殖分化以及形态的影响，了解人牙骨移植材料的生物相容性和细胞毒性。 方法 收集新鲜人离体牙，制备人牙骨移植材料，共聚焦显微镜下观察小鼠单核巨噬细胞 RAW264.7 与人牙骨移植材料共培养后对材料黏附情况。扫描电镜观察人牙骨移植材料、OSTEONⅡ人工骨植入物及未处理牙粉的形貌。配制不同成分浸提液，分 4 组：A 组（含 10%FBS 的 DMEM 培养液）、B 组（人牙骨移植材料）、C 组（OSTEONⅡ人工骨植入物）、D 组（未处理牙粉）。分别将 4 组浸提液与细胞共培养，倒置显微镜观察细胞形态变化定性判定细胞毒性，结合 MTT 法检测细胞增殖分化结果及细胞相对增殖率定量判定细胞毒性；通过锥虫蓝染色检测各组细胞活力；ELISA 法检测炎性因子 TNF-α 和 IL-6 表达。 结果 扫描电镜观察示，人牙骨移植材料和 OSTEONⅡ人工骨植入物的表面都具有均匀的孔状结构，而未经处理牙粉胶原纤维结构及脱矿牙本质层全层塌陷，无特定结构。共聚焦显微镜观察示，细胞在人牙骨移植材料上生长良好。细胞与浸提液共培养后，观察示 A、B、C 组细胞形态和数量正常，毒性反应分级均为 0 级，而 D 组均为 3 级。MTT 检测示，B、C 组各时间点细胞毒性均为 0 级或 1 级，提示材料合格；D 组培养 1 d 时细胞毒性为 2 级，3、5、7 d 均为 4 级，结合细胞形态分析，提示材料不合格。锥虫蓝染色示，各时间点 A、B、C 组细胞数量均显著高于 D 组，差异有统计学意义（P<0.05），A、B、C 组间差异无统计学意义（P>0.05）。ELISA 检测示，各时间点 A、B、C 组 TNF-α 和 IL-6 含量均显著低于 D 组，差异有统计学意义（P<0.05）；A、B、C 组间差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 人牙骨移植材料与小鼠单核巨噬细胞共培养无细胞毒性，其浸提液对细胞增殖分化无明显影响，并不增加炎性因子表达，具有良好的生物相容性，有望用于临床骨缺损修复