CD2相关蛋白剪接异构体启动子区及其缺失体的构建和活性分析

目的:构建CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)剪接异构体启动子区及其缺失体,转染HEK293及HeLa细胞,评价其启动子活性?方法:取稳定生长的HeLa细胞,常规方法提取总RNA,逆转录为cDNA并以此为模板,PCR扩增CD2AP剪接异构体之一CD2AP002转录起始位点上游2 200 bp的启动子区域片段,亚克隆这些片段至pGL-3基本载体上的多个克隆位点,构建含CD2AP002启动子的重组质粒?CD2AP002质粒构建成功后,以此质粒为模板重复上述步骤构建一系列CD2AP002启动子5′侧翼区缺失体?重组质粒及其缺失体转染人胚肾HEK293细胞及人宫颈癌HeLa细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的活性?结果:酶切?核酸序列分析证实,成功构建含CD2AP002启动子的重组质粒及其缺失体?经双荧光素酶活性检测证实不同片段大小的5′侧翼区序列缺失体均具有与片段长度相应的活性?结论:成功构建出在HEK293及HeLa细胞中具有活性的重组质粒及其缺失体?