Pellino1 SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF？κB信号转导的影响

目的：研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物（small ubiquitin?related modifier，SUMO）修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子?6（TNF receptor associated factor 6，TRAF6）介导的核因子κB（nuclear factor κB，NF?κB）信号转导的影响。方法：构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒，与TRAF6、泛素（ubiquitin，Ub）质粒共转染至HEK?293细胞中，荧光显微镜观察转染效率，免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用；同时，检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平。采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导炎症反应，分提胞浆胞核蛋白，Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α（inhibitor of NF?κBα，IκBα）的磷酸化和NF?κB P65的核转位，分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF?κB信号通路的影响。结果：与野生型Pellino1相比，SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平，而且可增加其与TRAF6的相互结合作用，并增强TRAF6的泛素化修饰；LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF?κB P65的核转位，转染使Pellino1 SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF?κB信号激活。结论：Pellino1 SUMO修饰突变，可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合，增强TRAF6的泛素化，最终促进TRAF6介导的NF?κB信号通路的激活。