EDU脉冲追踪小鼠心脏第二心场细胞迁移方法的优化

摘要 流出道（Outflow tract,OFT）发育畸形约占出生时检测到的人类先天性心脏病的 30%,OFT 和右室是由第二心场（Second heart field,SHF）祖细胞发育形成。SHF 祖细胞向心管部署、迁移使心管得以足够的伸展,是心脏形态发生所必需的。然而,迄今 SHF 发育及迁移部署过程仍不清楚。建立标记、追踪小鼠心脏第二心场细胞迁移的方法,对于阐明哺乳动物心脏 SHF 迁移、部署的细胞生物学过程具有重要意义。首先采用文献报道的 EDU（5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）脉冲追踪方法及剂量（10 mg/kg）,发现大部分胚胎并不能被 EDU 标记。接下来,分别对 EDU 标记的剂量以及脉冲标记的时间进行优化,分析 EDU 在 SHF 细胞中的标记情况、EDU 标记的 SHF 细胞向 OFT 的迁移情况。发现 EDU 剂量增加到 40 mg/kg 能对胚胎进行有效的标记（由 6 只孕鼠获得的 31 只胚胎均被有效的标记）,且不会对孕鼠和胚胎造成毒性;EDU 脉冲标记 2 h 和 4 h,EDU 在 SHF 细胞中的标记效率、EDU 标记 SHF 细胞迁移进入远端 OFT 的距离均没有差异。研究表明使用 40 mg/kg 的 EDU 脉冲剂量和 2 h 的标记时间,可对胚胎的 SHF 细胞进行有效的标记,经过 19 h 的追踪,EDU 标记的细胞能够迁移进入到远端 OFT 中