绒毛状烟草和林烟草全长cDNA文库构建及EST序列分析

摘要： 表达序列标签（EST）广泛应用于基因功能研究和分子标记开发。以普通烟草两个二倍体祖先种绒毛状烟草（Nicotiana tomentosiformis，TT）和林烟草（Nicotiana sylvestris，SS）多个组织为试验材料，使用CloneMiner cDNA文库构建方法构建了均一化全长cDNA文库，测序并进行序列拼接、功能注释、进化分析和标记开发。绒毛状烟草和林烟草均一化全长cDNA文库容量分别为0.72×106和1.12×106 pfu/mL，重组率分别约为94%和93%，插入片段平均长度为1.4 kb。测序获得20 953条EST序列，拼接为10 504个unigenes。与普通烟草EST序列混合拼接，产生34 450条contigs，123 511条singletons，烟草异源四倍体中T和S基因与绒毛状烟草、林烟草之间的相似性远高于两个二倍体祖先种之间。预测获得104 915个编码序列，其中73 670个序列包含功能结构域，81% unigenes在番茄中具有同源基因。鉴定了11 869个微卫星位点（SSR）和25 209个单核苷酸多态性位点（SNP）。这些数据信息对于烟草基因功能研究和分子育种具有重要价值