毕赤酵母表达重组牛胰脏羧肽酶A的响应面法优化

摘要 采用Central Composite Design(CCD)实验设计及响应面分析相结合的方法, 对毕赤酵母表达牛胰脏羧肽酶A的表达条件进行优化, 旨在获得牛胰脏羧肽酶A的最佳表达条件。单因素实验结果显示, 诱导时间为96 h时, 最佳甲醇含量为0.5%、最佳pH值为4、诱导时最佳菌体OD600值为7。在此基础上, 利用CCD实验设计及响应面分析法进行回归分析, 获得最优表达参数为：甲醇含量0.5%、诱导pH为5.90、接种前种子培养基OD600为6.54。在优化后的条件下进行验证实验, 得到牛胰脏羧肽酶A的表达量为0.325 mg/mL, 与理论值(0.326 mg/mL)相比, 相对误差较小, 为0.38%。同时, 对表达产物进行了Western Blot鉴定。研究表明, 采用响应面法分析优化牛胰脏羧肽酶A的表达条件准确可靠, 有助于找出最佳条件, 为指导其在发酵罐中进行高密度发酵生产牛胰脏羧肽酶A奠定基础