锌螯合物抗体可变区的克隆鉴定、真核表达及重组抗体的三维模建

摘要 筛选得到能分泌抗锌(Ⅱ)-二乙烯三胺五乙酸(Zn(Ⅱ)-DTPA)的单克隆抗体杂交瘤细胞株2E8E3。经测定,此株细胞分泌IgM,轻链κ型抗体。为了得到该抗体可变区序列,分别在小鼠抗体的信号肽区域和抗体的第一恒定区半胱氨酸残基(Cys)附近选择合适引物,通过RT-PCR方法,得到重(VH)、轻(VL)链可变区序列。将序列进行BLAST分析、SignalP分析、IMGT-V/QUEST分析,结果显示,克隆到的VH-2E8E3(465 bp)和VL-2E8E3(417 bp),序列与小鼠μ重链,κ轻链抗体可变区序列具有同源性(相似度>97%),前端序列符合信号肽特征,抗体骨架区(Framework region,FR)及第一恒定区均含有保守半胱氨酸(Cys)残基。在此基础上,构建了重组抗体的真核表达载体,转染293T细胞并用间接ELISA法初步验证其具有表达活性。对重组抗体进行了三维模拟,并推测了主要氨基酸残基。试验结果表明,克隆到了正确的2E8E3抗体可变区序列并初步鉴定为有活性