基于反转录环介导等温扩增技术检测大肠杆菌O157

摘要 建立反转录环介导等温扩增（Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification RT-LAMP）方法特异性检测大肠杆菌O157。针对大肠杆菌O157的特异性保守rfbE基因设计多组引物，通过对引物筛选和反应条件优化，建立了检测大肠杆菌O157的实时荧光RT-LAMP方法。利用大肠杆菌O157及其人工污染脱脂乳样品，研究了方法的特异性和灵敏度，并与rRT-PCR（Real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction）方法的灵敏度进行比较。结果显示，等温65℃条件下，30 min内能完成RT-LAMP扩增反应。所建立的实时荧光RT-LAMP方法特异性强，除了2株大肠杆菌O157以外其余菌株均未产生特异性扩增反应。同时该方法灵敏度高，对人工污染脱脂乳样品检测灵敏度能达到20 CFU/g，比rRT-PCR方法高10倍。建立的实时荧光RT-LAMP方法将为大肠杆菌O157现场快速检测提供有力手段