TGF-β1诱导马鹿茸MSCs软骨分化及c-myc基因的表达

摘要 鹿茸间充质干细胞(MSCs)是维持茸再生与骨化的重要组织, 旨在研究鹿茸MSCs的软骨分化及原癌基因c-myc对该过程的调控作用。利用成年塔里木马鹿生长60 d的鹿茸第2代间充质干细胞(MSCs, P2), 通过TGF-β1(10 ng/mL浓度)刺激, 诱导塔里木马鹿茸间充质干细胞向软骨分化, 采用免疫组化和阿利新蓝染色鉴定诱导结果, 并通过qPCR方法检测软骨分化过程中c-myc基因的表达变化。结果显示, MSCs在诱导后的第9天开始出现细胞形态变化, 由梭形向多角形转变, 原来菊花状的分布逐渐向铺路石状变化, 至14 d可观察到软骨陷窝, 21 d软骨细胞基质明显, 并开始出现细胞凋亡。非诱导组28 d细胞出现凋亡, 细胞内发现空泡。35 d两组细胞凋亡明显, 细胞折光性变差, 间隙变大。阿利新蓝染色鉴定, 诱导至第14天细胞基质中开始出现大量阳性染色。免疫组化实验检测, 诱导至21 d的细胞基质中出现棕色Col II阳性反应物, 随培养时间增加颜色加深, 并集中分布在细胞及其周围基质中。在软骨分化进程中, 第7、14、21和28天, 诱导组c-myc基因表达与非诱导组相比显著下调(P<0.05), 但诱导至35 d, 诱导组c-myc表达与非诱导组相比无显著差异(P>0.05)。在TGF-β1刺激下, 塔里木马鹿茸MSCs可以分化成软骨, 原癌基因c-myc下调表达诱导鹿茸MSCs进入凋亡状态并分化为软骨细胞