极端嗜酸热古菌Acidianus manzaensis胞外硫活化蛋白质基因的筛选及鉴定

摘要 以极端嗜酸热古菌（Acidianus manzaensis）为研究对象，基于比较蛋白质组学的研究方法筛选和鉴定了13个A. manzaensis胞外与硫活化相关的蛋白质基因，并从转录水平对其进行了验证。首先通过80℃缓慢摇动水浴30 min分别对A. manzaensis在单质硫（S0）和亚铁（Fe2+）为能源底物进行生长时的胞外蛋白质进行提取，并用双向电泳（2-DE）进行分离，然后选取在S0底物下差异表达的蛋白质斑点进行串联飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）鉴定和生物信息学分析及功能预测，最后用实时定量PCR（RT-qPCR）对筛选得到的胞外S0活化相关蛋白基因进行转录水平的验证；最终获得了13个极端嗜酸热古菌A. manzaensis胞外活化S0相关的蛋白质基因。筛选得到的蛋白质中一半以上含有较多的半胱氨酸残基（Cys），说明胞外富含巯基（-SH）的蛋白参与了S0活化；其中谷氧还蛋白（glutaredoxin）和FAD键合氧化酶均含有-CXXC-结构域，且两种蛋白质的基因表达量较高，说明含有-CXXC-结构域的蛋白质在极端嗜酸热古菌A. manzaensis活化S0的过程中起重要的作用