PDGF-GAL 真核表达载体的构建及细胞表达

摘要 旨在构建真核表达载体pcDNA-PDGF-GAL，观察重组质粒转染N-2a 细胞后甘丙肽基因（galanin，GAL）的表达水平。采用PCR 方法，以重组质粒pUC18-PDGF-GAL 为模板，扩增PDGF-GAL 基因序列，最终定向克隆入载体pcDNA3.1 并替换该载体的CMV 启动子与增强子序列，从而构建具有神经细胞特异性的表达载体pcDNA-PDGF-GAL。然后利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠N-2a 细胞，分别在转染后24、48 和72 h 收集细胞及细胞培养物，采用RT-PCR 和ELISA 方法，鉴定GAL 基因在神经细胞中的过表达。结果显示，经PCR 和DNA 序列测定证实，目的基因已插入表达载体，RT-PCR 和ELISA 证明，脂质体法瞬时转染N-2a 细胞实现GAL 基因的过表达。成功构建pcDNA3.1-PDGF-GAL，实现GAL 基因在N-2a 细胞过表达，从而为制作过表达GAL 的稳转细胞及进一步研究GAL 在神经系统的生物学功能奠定基础