SMAP-29抗菌肽的原核表达、纯化及活性检测

摘要 旨在利用基因工程技术表达出有活性的重组SMAP-29 抗菌肽。根据大肠杆菌偏好的密码子优化smap-29 基因序 列，在目标肽序列N 端添加肠激酶识别位点，C 端添加终止密码子，化学合成基因序列，通过EcoR I 和Hind III 双酶切位点连接 到pET-28a（+）上构建重组表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达重组蛋白，Ni-NTA 亲和层析纯化，肠激酶切割后释放出 SMAP-29 抗菌肽，检测其抗菌活性。结果显示，带有6×His 标签及肠激酶识别位点的SMAP-29 重组融合蛋白在大肠杆菌中以包 涵体形式表达，利用Ni-NTA 亲和层析可获得纯化的融合蛋白，肠激酶切割后释放出的SMAP-29 重组抗菌肽对大肠杆菌、金黄色 葡萄球菌和白念珠菌的最小抑菌浓度依次为10、20 和40 μmol/L