菌丝霉素MP1106融合蛋白的复性及纯化方法

摘要 旨在建立高效、快捷的菌丝霉素衍生物MP1106大肠杆菌表达系统。通过基因融合的方式构建生物表面活性剂-菌丝霉素衍生物（DAMP4-MP1106）融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中进行表达；并对目的蛋白MP1106进行分离纯化和分子内二硫键鉴定。结果显示,融合蛋白DAMP4-MP1106在大肠杆菌中以包涵体的形式成功表达,表达产物在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化；经检测分析,摇瓶中DAMP4-MP1106的发酵产量为118 mg/L,纯度为94.7%；采用96孔板筛选并建立复性方法,获得水溶性融合蛋白DAMP4-MP1106；并经TEV蛋白酶酶切以及二次Ni2+-NTA亲和层析纯化,可获得纯度为99%的抗菌肽MP1106 18 mg/L,回收率达到了38.4%。通过简捷方法快速鉴定分子内的二硫键,初步证实了抗菌肽MP1106完成了分子内结构正确折叠。建立了高效快捷的菌丝霉素大肠杆菌表达系统