地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA序列克隆与毕赤酵母表达

摘要 依据已报道的地鳖虫成熟肽cDNA序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675bp地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列。将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达得到重组表达蛋白,经SDS-PAGE电泳和活性鉴定,表明重组EFP在毕赤酵母中均获得表达,重组表达蛋白相对分子质量为28.2kD,表达产物分子质量与理论分子质量相符。重组蛋白在毕赤酵母中以分泌形式表达,具有纤溶活性