谷氨酸棒状杆菌合成5-氨基乙酰丙酸的途径构建与发酵优化

摘要 5-氨基乙酰丙酸（5-amino levulinic acid，ALA）是生物体内天然存在的一种非蛋白质氨基酸，在农业和医药等领域应用广泛。为了在谷氨酸棒状杆菌中建立ALA碳四合成途径并优化其发酵体系，首先在谷氨酸棒状杆菌中过表达沼泽红假单胞菌来源的ALA合成酶（ALAS），建立高效的ALA碳四合成途径，然后从不同发酵培养基的比较、诱导剂和底物甘氨酸的浓度以及初始接种量等不同方面对ALA摇瓶发酵工艺进行了优化。结果显示，过表达HemA的13032/pZWA1菌株 ALA产量达到1.41 g/L，是对照菌株的67.14倍。ALA的最优摇瓶发酵条件为以酵母粉为氮源的M9培养基，采用5%的接种量0.1 mmol/L IPTG进行HemA的诱导表达，体系中甘氨酸的浓度要控制在4 g/L，摇瓶中ALA产量可达到3.28 g/L，比优化前提高了132.62%。采用发酵优化的条件，在5 L发酵罐的放大发酵中ALA产量可达10.08 g/L，这是现有报道中谷氨酸棒状杆菌一步发酵合成ALA的最高产量