家蝇14-3-3蛋白基因的cDNA克隆与序列分析

摘要 从家蝇cDNA文库中筛选获得家蝇14-3-3（MD14-3-3）基因DNA序列，以该基因的cDNA文库质粒为模板，PCR方法对MD14-3-3 基因进行扩增，以pET 28a（+）为载体构建重组质粒。采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析。结果表明，MD14-3-3基因ORF全长771 bp，编码257个氨基酸，理论分子量29.35 kD；等电点5.78，属于亲水性的酸性蛋白，含有多种酶的结合位点，有14-3-3家族结构域和活性位点，定位于细胞核中，二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。经PCR、双酶切及NDA测序结果均表明pET 28a（+）- MD14-3-3重组质粒构建成功