耐热DNA聚合酶基因双元载体的初步构建

摘要 TaqDNA聚合酶是PCR反应中的重要试剂,它具有结构性稳定和耐高温的特性,有能在90℃以上合成DNA的能力,因此被广泛使用于DNA扩增技术当中,但是国内尚未报道有关TaqDNA聚合酶基因用于转基因的研究。若将此耐热基因转入某些经济作物中培育耐热新品种,将会有很好的前景和实用价值。本试验将初步构建TaqDNA聚合酶的基因表达双元载体。通过引物设计,用PCR法从含有Thermus aquaticus DNA polymerase克隆基因的散装TaqDNA聚合酶中扩增耐热DNA聚合酶基因,得到约2.5kb的DNA片段。扩增片段连接到质粒pUC19中测序证实是TaqDNA聚合酶基因,再将该片段重组到双元载体pBin19中,通过蓝白筛选选择重组子,构建耐热DNA聚合酶的基因双元载体pBin19-Taq。对其作进一步的加工,即插入植物启动子和增强子等后,可通过土壤农癌杆菌的介导作用,用作植物转基因之用