重组溶葡萄球菌酶成品蛋白含量测定方法的建立

摘要 重组溶葡萄球菌酶（recombinant lysostaphin,rLysn）对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,是一种新型抗菌药物,含有该酶的药用制剂在临床上能有效控制金葡菌感染。为在rLysn成品中增加蛋白含量测定以控制制剂的质量,建立了成品中rLysn蛋白含量测定方法,并进行验证。采用体积排阻高效液相色谱法（size exclusion high performance liquid chromatograph,SE-HPLC）测定rLysn理化对照品及成品蛋白质含量。色谱柱：TSK gel 2000SWXL（7.8 mm×30 cm,5 μm）;流动相：20 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）+0.3 mol/L NaCl;流速：0.5 mL/min;柱温：25℃;检测波长：280 nm。结果显示,rLysn在2-32 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r2=1）;低、中、高3种浓度的rLysn理化对照品空白加标平均回收率为102.9%,成品加标平均回收率为102.1%;3种不同上样量在不同时间内测定,蛋白含量RSD<1%;每隔1 h测定同一支供试品溶液,蛋白含量RSD为0.98%;同一批供试品溶液取6份进样,蛋白含量RSD为1.71%。实验结果表明,采用SE-HPLC方法简便,准确性、精密度、稳定性及重复性好,可用于rLysn成品蛋白质含量的测定