吉富罗非鱼源无乳链球菌GAPDH融合基因的构建及其原核表达

摘要 利用重叠延伸（SOEing）PCR技术, 将吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）源无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）ZQ0910株表面免疫原性蛋白（Surface immunogenic protein, Sip）基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因通过Linker序列融合, 构建成为Sip-GAPDH融合基因。将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（+）中, 在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。结果表明, 重组质粒pET-32a-Sip-GAPDH在大肠杆菌BL21（DE3）中表达后所获得的融合蛋白Sip-GAPDH分子量为102.01 kD, 表达最佳条件为37℃, IPTG浓度0.1 mmol/L, 诱导5 h。Western blot鉴定结果表明融合基因得到了成功表达