应用CRISPR/Cas9系统下调长链非编码RNA HOTAIR

摘要 近来CRISPR/Cas9系统作为一种成熟的基因编辑工具,被广泛应用。然而由于长链非编码RNA特殊的结构,该系统针对其研究的报道并不多见。选取与肿瘤生成、发展密切相关的长链非编码RNA HOTAIR为研究对象,通过构建Cas9核酸酶稳定遗传表达细胞株,建立pgRNA文库,对其进行基因敲除。qRT-PCR结果显示,pgRNA/Cas9系统靶向HOTAIR基因可使其表达下调60%。MTT增殖检测及细胞划痕实验结果表明：此系统介导的HOTAIR下调可明显抑制HeLa细胞的增殖与迁移。同时,肿瘤抑制因子p21、p53、pRB和DLC1转录水平的变化也暗示,HOTAIR对细胞功能的影响与其调控相关肿瘤抑制因子之间存在紧密联系。因此,利用Cas9技术抑制HOTAIR的表达对全面了解其功能具有重要意义