两步串联层析法纯化抗TNF-α 单克隆抗体

摘要 旨在建立从重组CHO细胞发酵培养液中纯化抗TNF-α单克隆抗体的两步串联层析法。将含有抗TNF-α单克隆抗体的料液经两次离心、一步过滤的预处理后，用protein A填料捕获，阳离子填料Sourec30精细纯化。精细纯化过程中利用DoE的方法，采用CCF(Central composite face)设计，探讨了洗脱pH值及盐浓度对纯化的影响。纯化后的抗TNF-α单克隆抗体经HPLC以及毛细管电泳，检测其浓度、纯度以及多聚体含量。结果显示，亲和层析的最佳洗脱条件为pH4.0。通过DOE优化，为达到质量目标(回收率90%以上，纯度97%以上，多聚体0.3%)，筛选出最佳洗脱范围为0.05-0.13 mol/L NaCl以及pH5.7-6.0，选定pH6.0与0.10 mol/L NaCl作为Source洗脱条件，此时回收率94.3%，纯度97.3%，多聚体0.3%，其质量与参比制剂接近