电激作用引起的嗜热链球菌的遗传转化

摘要 至今还没有适于嗜热链球菌的转化系统,并且也难以使该菌的原生质体再生。因此,对电激法作为另一种把 DNA 引入该菌的转移方法作了试验。把对数中期的嗜热链球菌悬浮在含有0.3M棉子糖、7 mM 磷酸钾和1 mM 氯化镁的缓冲液(pH7.4)中,该液同时含有10μg的携带红霉素抗性标记的链球菌克隆载体 pV736的 DNA。在2000伏的电压下和4.5毫秒的时间内完成电激反应,然后将此细胞悬浮液在4℃下保持30分钟。接着把20μg/l 的红霉素沉积在乳糖琼脂培养基上。这种方法的转化水平不高(每μg DNA 约获得10个转化子),也不