单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体RL1的表达及其抗凋亡作用

摘要 单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体(LAT)-RL1对放线菌素D诱导的凋亡作用的研究。构建重组pEGFP-RL1质粒，转染Vero细胞，RT-PCR及荧光鉴定重组质粒的表达。放线菌素D诱导Vero细胞凋亡，通过Hochest33342荧光染色观察细胞形态变化，流式细胞术检测细胞凋亡率，JC-1荧光观察膜电位变化，Caspase 3 凋亡蛋白检测。RT-PCR和荧光观察表明该真核表达载体能在Vero细胞中高表达。Hochest33342染色转染了pEGFP-RL1的Vero细胞经放线菌素D凋亡诱导后，细胞形态正常。流式结果表明转染重组质粒pEGFP-RL1且经诱导凋亡组与正常对照组凋亡率无差异，而显著低于诱导凋亡组和转染空质粒pEGFP-C2诱导凋亡组。转染重组质粒pEGPF-RL1的细胞JC-1染色后，红色细胞的比例要远大于绿色细胞的比例，而转染空质粒pEGFP-C2被染成绿色细胞的数量较多。Caspase-3结果表明转染了空质粒 pEGFP-C2 的Vero细胞经诱导凋亡后，活性显著高于转染了 pEGFP-RL1 经放线菌素D诱导凋亡后的Vero细胞和正常Vero细胞。HSV-2 LAT RL1 具有抗放线菌素D诱导的Vero细胞的凋亡作用