棉铃虫(Helicoverpa armigera)FK506结合蛋白基因的克隆、表达与纯化

摘要 为了深入了解FK506结合蛋白基因的作用和探索调控棉铃虫CYP6B6的表达机制，基于单酵母杂杂交结果采用RT-PCR的方法从棉铃虫的中肠cDNA中扩增得到了FK506结合蛋白基因，将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET32a中，在大肠杆菌BL21中用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达，通过镍柱离子亲和层析纯化目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果，并用Western blotting进行验证。结果表明，克隆得到的目的基因大小为327 bp，编码108个氨基酸残基，预测蛋白质分子量和等电点分别是11.78 kD和7.87。氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框，且没有信号肽。重组质粒pET32a-FKBP在大肠杆菌BL21中获得表达，主要以可溶性形式存在，经亲和层析柱纯化获得目的蛋白，Western blotting检测发现纯化的目的蛋白大小正确且纯度高