VSV糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测

摘要 构建水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)酵母双杂交诱饵载体，检测其在酵母细胞中的表达和自激活作用，为进一步研究酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作用蛋白奠定基础。通过RT-PCR方法从水泡性口炎病毒(VSV)克隆糖蛋白(G)基因，BamH I和Sal I双酶切后连接诱饵载体pSos，获得诱饵质粒pSos-VSV-G，经测序鉴定后pSos-VSV-G转化到酵母菌株cdcH25(α)，在营养缺陷培养基中观察pSos-VSV-G的自激活作用和毒性作用，同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。成功扩增VSV-G基因，并准确克隆入pSos中，诱饵载体pSos-VSV-G成功转化到酵母菌株cdcH25(α)中，经表型筛选检测无自激活作用和毒性作用，蛋白印迹法检测证实pSos-VSV-G在酵母细胞中表达诱饵蛋白。 可以利用酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作的蛋白质