紫色色杆菌苯丙氨酸羟化酶的异源表达及重组酶学性质研究

摘要 来源于紫色色杆菌（Chromobacterium violaceum）的苯丙氨酸羟化酶结构简单，性质更接近于人的苯丙氨酸羟化酶，具有潜在的医药应用价值。从紫色色杆菌基因组中克隆得到苯丙氨酸羟化酶基因pah。构建重组表达载体pET24a-pah，并在Escherichia coli BL21（DE3）中实现高效表达。离子层析纯化后，重组蛋白比酶活高达503.2 U/mg。酶学性质研究显示，该重组酶的最适温度为40℃左右，50℃时PAH的半衰期为15 min；最适pH在7.5左右，在pH6-8范围内较稳定。37℃，pH7.5条件下，Km值为1.5 mmol/L，Vmax为0.5 mmol/min，kcat为5.05/s，催化效率kcat/Km 为3.37 L/mmol·s